为避免提取的核酸在柜内反复循环,造成标本之间的交叉污染,出现假阳性结果,该区域配备的生物安全柜必须是B2型的。生物安全柜工作区垂直气流全部来自实验室,排风经过过滤器(www.rfilter.com)过滤后直接排至室外,不允许回到安全柜和实验室中。
根据经验,如果实验室内配备生物安全柜,每配备一台,实验室的面积增加10m2;标本制备区的面积宜在25m2~30m2之间。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。
扩增室该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。
在巢式PCR测定中,通常在轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。
扩增室主要配备PCR实验室的核心仪器PCR仪,本文实例中使用了ABI7500和ABI9700两种PCR仪。
在实验室建造过程中,需要给PCR仪配备专门的UPS电源,以保证其正常工作。该区面积控制在15m2~20m2。
本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。建议采用5~10Pa压差,在控制上比较容易实现。
3●空气消毒实验室配备充足的空气消毒机和紫外线灯,每天实验前后,采用紫外线灯各照射1h。实验后,在紫外线灯照射的基础上,再空气消毒机消毒1h。
4●废弃物的处理措施
废液的处理:标本检测后产生的废液,用含5500mg/L的消毒液彻底灭活后,倒入医院污水处理系统。盛装容器用5000mg/L 含氯消毒液浸泡30min,然后清洗干净。
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PCR实验室规划设计需关注的要点
3.1 全新风空调系统模式
3.1.1 空调形式
PCR负压实验室净化空调系统采用全新风恒温恒湿净化空调机组+送风口的空调系统形式。
3.1.2 送风系统
新风经过恒温恒湿净化空调机组进行热湿处理、过滤处理(初效(G4)、中效(F9)、(H14))之后,送至洁净房间送风口,后送至洁净房间,达到排除室内热、湿负荷的效果并且保证送入室内的为洁净空气。每个实验区域及相关辅房的气流组织均为上送风、下排风。